Бузулукский бор

News image

Бузулукский бор Оренбургской области – уникальное, заповедное место – громадное скопление реликтовых сосен и свежих на...

Свойства хвои

News image

 «Никнут шелковые травы, пахнет смолистой сосной…» Эти прекрасные строки из стихотворения Сергея Есенина наверняка знакомы мн...

Фрукты против радиации

News image

Воздействие радиации на орган можно ослабить с помощью правильно составленного рациона питания который следует включать мо...

Голландия – земля цветов

News image

Это свершилось! Величайший триумф одного, с трудом скрываемая досада многих и невыразимое восхищение тысяч. Главная ул...



Ботаника как наука - Клеточная биотехнология

С целью получения эксплантов для каллусной и опухолевой культур, микроклонального размножения, изучения гормональной регуляции используют стерильные проростки. Семена для проращивания высевают либо на воду, либо на питательную среду.

Растительные объекты перед стерилизацией тщательно отмывают проточной водой, иногда с моющими средствами, очищают от излишних тканей. С корнеплодов и корней снимают кожуру, с побегов – кору, с почек – кроющие чешуи.

Растительные экспланты стерилизуют растворами веществ, содержащими активный хлор (хлорамином, гипохлоритом Са и Nа, сулемой), бром (бромной водой), перекисью водорода, спиртом, нитратом серебра, диацидом, антибиотиками.

Этиловый спирт часто применяют для предварительной стерилизации, протирая им поверхность материала или погружая материал на несколько секунд в абсолютный спирт. Иногда такой стерилизации достаточно, ее используют при работе с плодами, семенами, побегами, завязями.

Гипохлорит кальция (хлорная известь) используется в виде 5-7 % раствора для обработки почек, завязей, цветков, семян, побегов в течение 5-8 минут.

Гипохлорит натрия используется в виде 0,5-5 % раствора для обработки любых эксплантов в течение 1-20 минут. Это вещество является клеточным ядом, поэтому время стерилизации и концентрацию подбирают экспериментально. Например: для изолированных зародышей используют 2-3 % раствор в течение 10-15 минут, а для сухих семян 3-5 % раствор в течение 1 часа. Остатки гипохлорита натрия сначала удаляют 0,01 н HCl, а затем 8 раз промывают автоклавированной дистиллированной водой.

Хлорамин применяют в концентрации 1-6 %. Пыльники и молодые зародыши обрабатывают в течение 1-3 минут, сухие семена – 30-60 минут, затем промывают стерильной дистиллированной водой 2-3 раза.

Сулема – токсичное вещество и требует особой тщательности, как при хранении, так и при подборе концентрации для отдельных объектов. Для стерилизации зародышей используют 0,1 % раствор в течение 1-3 минут, для корне - и клубнеплодов – до 10-20 минут.

Растворы, содержащие активный хлор используются 1 раз и готовят их непосредственно перед работой.

Диацид используется в 0,2 % растворе для стерилизации корнеплодов, семян, кусочков, тканей, верхушечных меристем, изолированных зародышей, пыльников. Диацид готовят, растворяя отдельно 330 мг этанолмеркурхлорида и 660 мг цетилпиридиния хлорида в горячей воде (330 мл), затем их смешивают и доводят объем жидкости до 1 л, добавляют несколько капель детергента твин-80; хранят в плотно закрытой колбе в темноте.

Также применяются 5%-й раствор формалина или фенола. Антибиотики применяют для стерилизации растительного материала, инфицированного бактериями (ткани корончатогалловых опухолей). Часто применяют стрептомицин и тетрамицин 10-80 мг/л, ампициллин 200-400 мг/л, левомицитин, каномицин и другие. Семена могут быть обработаны газами (оксид пропилена).

Стерилизацию можно разделить на три этапа:

- предварительная стерилизация исходного растительного материала. Условия обработки варьируют в зависимости от объекта. Хранящиеся органы промывают водопроводной водой, фрагменты стебля, корня или листа также промывают проточной водопроводной водой и помещают в спирт. Предварительная стерилизация семян – более длительная процедура, зависящая от степени их загрязнённости.

- собственно стерилизация. Предварительно простерилизованные ткани и органы помещают в стерилизующий раствор. Необходимое условие процесса стерилизации – это обеспечение достаточной степени чистоты объекта, и сохранность его жизнеспособности.

- Постстерилизация. Отмывание объекта от стерилизующего раствора порциями дистиллята.

 


Читайте:


Добавить комментарий


Защитный код
Обновить

Редкие растения

Тюльпан Грейга

News image

Тюльпан Грейга - один из самых крупноцветковых среднеазиатских видов тюльпанов и один из самых красивых. В ...

Солнцецвет арктический

News image

Солнцецвет арктический (Helianthemum arcticum) — многолетний полукустариник, относящийся к семейству ладанниковых. Считается редким видом, занесенным в ...

Тюльпан Кауфмана

News image

У любого культурного растения есть дикий предок. У тюльпанов это дикорастущие виды из Турции, Ирана и ...

Фиалка надрезанная

News image

Фиалка надрезанная — один из нежнейших и прекраснейших цветков. Относящаяся к семейству фиалковых, она предпочитает ра...

Астранция большая

News image

Астранция большая (Astrantia major) — эффектное многолетнее травянистое растение, относящееся к семейству зонтичных Apiaceae (Umbelliferae). Ас...

Мурайя из садов императора

News image

Недавно в России появилось редчайшее японское растение - мурайя. Наблюдение за его ростом, развитием, размножением и ...